先回答你的问题,转入外源基因的农杆菌不能较载体,它本身是外源基因的受体,携带外源基因的质粒或者噬菌体才是载体 。
你想问基因表达载体的构建,这个问题太大,而且表达载体多种多样,用处也很多,所以很难一下子概况 。我只能大概说一下:
原理:将外源基因片段与载体连接(载体通常选用质粒或者噬菌体或其他病毒),将重组的载体转染受体细胞,使之整合入宿主基因组或者在稳定存在于胞质内,是宿主细胞能够表达载体上的外源基因,从而获得新性状或者新产物 。
大概步骤:
1)从基因组或cDNA上克隆得到完整的目的基因(至少包含CDS区),通常在两端加粘性末端或重组位点
2)选择合适的表达载体(真核、原核、噬菌体、某些病毒、标记等)
3)将克隆得到的目的基因与载体连接
4)将重组载体通过某种手段转入受体,即宿主中(化学转染、脂质体、电转、显微操作等)
5)筛选阳性的宿主细胞并扩繁
文章插图
基因的过表达载体有哪些?
【如何构建一个基因的过表达载体,基因的过表达载体有哪些?】基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤,而基因表达载体的本质是DNA,组成元素有碳氢氧氮磷,其中氮在含氮碱基中,磷在磷酸基团中
完整的表达载体必须包括:
1、复制子,在细菌中扩增时所必须.
2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.
3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.
4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.
5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.
6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.
另:表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密码子和终止密码子.
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